發(fā)布時間:2012-07-14 10:44:58
在發(fā)酵行業(yè)運用消泡劑是必須的，而丙酮丁醇菌的分離與純化同樣需要丙酮丁醇菌消泡劑的協(xié)助，達到理想的效果。
一、丙酮丁醇菌的分離與純化方法
在土壤、細泥、糞便中及新鮮果實、蔬菜的表面上，均有丙酮丁醇菌存在。利用它的孢子的嫌氣性和耐熱性，并配合使用丙酮丁醇菌消泡劑，可以采用熱淘汰法和單細胞分離法，以獲得優(yōu)良的菌種。由于丙酮、丁醇發(fā)酵時，易受雜菌侵染而導致酸敗，所以，丙酮丁醇工廠必須經(jīng)常進行菌種的分離與純化工作，以保證正常生產(chǎn)。
所謂熱淘汰法，即將含有丙酮丁醇菌的試樣接入5%的玉米醪試管內(nèi)，再放在沸水浴中1-1.5 min，殺死不耐熱的雜菌和熱抵抗力較差的孢子，而保留對熱抵抗力較強的丙酮丁醇菌孢子，然后在嫌氣狀態(tài)下培養(yǎng)。培養(yǎng)液產(chǎn)生大量氣體，醪蓋上升，這時可轉接到新鮮培養(yǎng)基試管內(nèi)，同法進行熱淘汰和嫌氣培養(yǎng)，如此反復多次，即可獲得較好的菌株。欲獲得純培養(yǎng)或者需從發(fā)酵醪中選取優(yōu)良菌株，可用嫌氣平板進行單菌落分離。如用有明膠或碳酸鈣的培養(yǎng)基，則可能出現(xiàn)溶解圈。然后接入玉米醪中測定氣體產(chǎn)生量，醪蓋上升情況和丙酮產(chǎn)量。獲得的優(yōu)良菌種用沙土管保存。
二、丙酮丁醇菌擴大培養(yǎng)
丙酮丁醇菌通過丙酮丁醇菌消泡劑進行擴大培養(yǎng)，可以得到優(yōu)良的丙酮丁醇菌種。沙土孢子—試管—種子瓶—第一種母罐—第二種母罐—發(fā)酵罐。
1．試管菌種的培養(yǎng)：選取優(yōu)良菌種的砂土孢子1-2g，接入10ml5%濃度的玉米醪與丙酮丁醇菌消泡劑中，并將此管在100℃沸水中熱處理1-2 min，急速冷卻至37℃，然后置于真空干燥器內(nèi)進行培養(yǎng)（2 666 Pa以下溫度保持在37-39℃）。
2．種母瓶培養(yǎng)：將一支試管菌種接種到盛有5%濃度的玉米醪液的種母瓶中，在常壓下培養(yǎng)24h，即可接入第一種母瓶。一般丙酮丁醇菌孢子萌發(fā)時，要求嫌氣條件較高，營養(yǎng)體繁殖時，由于本身產(chǎn)生的H2和CO2與添加的丙酮丁醇菌消泡劑已能滿足嫌氣條件。
3．第一種母罐：其中盛有6%濃度的玉米醪接入種母瓶的醪液，培養(yǎng)12-15h后，即可接入第二種母罐。
4．第二種母罐：其中盛有8%濃度的玉米醪，接入第一種母罐醪液，培養(yǎng)20 h左右，然后將總量1／3～1/2送入發(fā)酵罐。
制備種醪的方法有間歇調(diào)制種醪法，半連續(xù)調(diào)制種醪法，利用部分發(fā)酵醪制種醪法。本文參考《發(fā)酵微生物學》一書。
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