發(fā)布時(shí)間:2012-12-18 11:04:55
1、吸附法
1）白土及活性氧化鋁吸附法：
白土類是以硅酸鋁為主要成分的粘土，隨其種類不同，能吸附酶或蛋白質(zhì)的種類和數(shù)量也不同，一般在弱酸性條件下吸附酶或蛋白質(zhì)，在中或弱堿性條件下解吸。白土先用2 mol/L鹽酸活化。
活性氧化鋁與微生物高效消泡劑也是最常用的吸附酶或蛋白質(zhì)的吸附劑之一?？梢杂妹鞯\、硫酸銨等調(diào)制，加熱使之活性化。酶或蛋白質(zhì)一般在弱酸性條件下吸附，在弱堿性條件下解吸。
例如，用高嶺土吸附菠蘿蛋白酶，在pH4-6，用5%的蘇州合浦高嶺土，可以將菠蘿汁中95%的菠蘿蛋白酶吸附。
將吸附了菠蘿蛋白酶的高嶺士分離收集后，用Na2CO3稀溶液調(diào)pH至6.5-7.0，然后加NaCl或硫酸銨洗脫。作為洗脫劑，后者的效果比前者為好。當(dāng)洗脫液的量達(dá)到菠蘿蛋白酶原體積的1/5時(shí)（即相應(yīng)于濃縮了5倍），菠蘿蛋白酶的洗脫率為70%-85%。
2）淀粉吸附ɑ-淀粉酶的方法：
一定的酶只作用于特定的基質(zhì)，這一事實(shí)說明兩者之間有一種特別的親和力。因此，用基質(zhì)與微生物高效消泡劑吸附那種對基質(zhì)具有特定作用的酶，在道理上是說得通的。但作為吸附劑的基質(zhì)首先必須是固相物；其次在吸附酶的過程中，這種基質(zhì)不會所吸附而又專門能作用于它的酶所分解，或分解程度極微；第三是單位重量的基質(zhì)吸附這種特定酶的能力均應(yīng)該足夠大?，F(xiàn)發(fā)現(xiàn)生淀粉對ɑ-淀粉酶的吸附是比較接近于上述條件的。
(1)生淀粉的膨化處理：為了加強(qiáng)吸附力，生淀粉必須經(jīng)膨化處理，例如，在125℃加熱處理30 min。具體做法是將商品干淀粉放在加壓釜內(nèi)攤成厚5 mm的薄層，微生物高效消泡劑在各種溫度下處理20 min，然后作吸附試驗(yàn)，以求取更佳溫度和時(shí)間。
(2)控制變數(shù)
a．有機(jī)溶劑或中性鹽的濃度：酶是親水膠體，酶分子有周圍水化層的保護(hù)，不容易被淀粉所吸附。為了提高淀粉的吸附能力，必須降低酶分子的親水性。可以先用有機(jī)溶劑、微生物高效消泡劑或中性鹽處理，加入有機(jī)溶劑的量，乙醇為35%（容量）左右，丙醇為20%（容量）左右；加入硫酸銨的量為15%-20%（重量）左右。加入的限度，一般應(yīng)使目的酶不發(fā)生沉淀。如果溶液因其它雜質(zhì)沉淀而發(fā)生渾濁，必須予以濾除，然后再加淀粉吸附。
b．溫度：溫度低有利于吸附，溫度高有利于解吸。在加乙醇情況下，溫度應(yīng)控制在較低范圍，如0-5℃。
c．pH：原則上應(yīng)在該酶穩(wěn)定的pH范圍，實(shí)驗(yàn)表明，pH偏低一些吸附效果較好，對BF-7685a-淀粉酶，可控制pH為6.0-5.8。
d．ɑ-淀粉酶的濃度：當(dāng)酶液中ɑ-淀粉酶的濃度很低時(shí)，提高其濃度能顯著提高每克淀粉吸附的a-淀粉酶的絕對量，但當(dāng)酶液中ɑ-淀粉酶的濃度達(dá)到每毫升600 U以上時(shí)，再進(jìn)一步提高酶的濃度，對節(jié)省淀粉的效果顯著下降。
e．淀粉的加入方式：例如，BF-7658a-淀粉酶與微生物高效消泡劑發(fā)酵液的濾清液，其中加入硫酸銨的濃度為18%（重量%），a-淀粉酶活力為222 U／ml。pH5.5，在1 0℃加膨化玉米淀粉，攪拌15min?？刹捎脙纱挝交蛞淮挝椒?。
2、噴霧干燥法
直接制成粉末酶制劑，可用下列幾種方式：
1）離心式噴霧干燥器干燥全發(fā)酵液。
2）先減壓濃縮后噴霧干燥。
3）先鹽析后噴霧干燥。
4）噴霧干燥與流化床干燥結(jié)合。
3、液體酶制劑
以Novo廠制造枯草桿菌ɑ-淀粉酶液體制劑為例：發(fā)酵消泡劑發(fā)酵液加5%硅藻土后壓濾，濾液再加合成高分子絮凝劑，離心分離除去絮凝沉淀物，然后在30-35℃用降膜蒸發(fā)器蒸發(fā)，增濃3-5倍，最后加穩(wěn)定劑。
本文參考《發(fā)酵微生物學(xué)》一書。
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